ACCUEIL

Consignes aux
auteurs et coordonnateurs
Nos règles d'éthique
Autres revues >>

Sciences des Aliments

0240-8813
parution suspendue
An international journal of food science and technology
 

 ARTICLE VOL 20/2 - 2000  - pp.237-252  - doi:10.3166/sda.20.237-252
TITLE
Development of simultaneous determination of thiols, ascorbic acid and their oxidized forms using HPLC with electrochemical detection. Application to the study of the reaction catalyzed by GSH-DHA oxidoreductase

RÉSUMÉ

Mise au point d’une méthode HPLC avec détection électrochimique permettant le dosage simultané des thiols, de l’acide ascorbique sous leurs formes réduites et oxydées. Application à l’étude de la réaction catalysée par la GSH-DHA oxydoréductase.
Une méthode HPLC rapide et sensible a été mise au point pour le dosage simultané de l’acide ascorbique (AA), du glutathion (GSH) et de la cystéine (CSH) en vue de l’appliquer aux pâtes de farine de blé. La détection électrochimique utilisée permet le dosage des thiols sous leur forme native (sans dérivation). La phase mobile est constituée par une solution de dihydrogénophosphate d’ammonium (100 mM) ajustée à pH 2,8 par l’acide o-phosphorique. La première électrode de mesure dont le potentiel est fixé à 0,6 V permet le dosage de AA alors que la seconde fixée à un potentiel de 1,05 V permet celui des thiols. Les limites de détection sont de 5 et 10 pmoles injectées pour CSH et GSH et de 1 pmole injectée pour AA, respectivement. Les formes oxydées de ces composés sont quantifiées par la même technique HPLC après traitement de l’échantillon par le dithiothréitol. Cette méthode a été appliquée à un milieu contenant GSH, CSH et de l’acide déhydroascorbique (DHA) auquel a été ajoutée une préparation purifiée de GSH-DHA oxydoréductase. L’analyse du milieu réactionnel après action de l’enzyme a permis de mettre en évidence la formation simultanée des formes oxydées du glutathion (GSSG), de la cystéine (CSSC), mais aussi du disulfure mixte GSSC.

ABSTRACT

A rapid and sensitive high performance liquid chromatography method has been developed for the simultaneous determination of ascorbic acid (AA), glutathione (GSH) and cysteine (CSH) which can be applied to supplemented wheat flour doughs. Electrochemical detection was used and allowed thiol * Chaire de biochimie industrielle et agro-alimentaire, Conservatoire national des arts et métiers, 292 rue Saint-Martin, 75141 Paris cedex 03, France. Correspondence nicolasj@cnam.fr detection without chemical derivatization. The mobile phase was composed of 100 mM ammonium dihydrogenphosphate, adjusted to pH 2.8 with o-phosphoric acid. The first electrode potential was fixed at 0.6 V for AA detection, the second electrode potential was fixed at 1.05 V for thiol detection. The detection limits were 5 and 10 pmoles for CSH and GSH respectively, and 1 pmole for AA. Oxidised forms can be quantified after reduction with dithiothreitol. The method has been applied to model system to highlight the mixed disulfide GSSC formed during the reaction catalysed by GSH-dehydroascorbate oxidoreductase in the presence of its substrates (GSH and dehydroascorbic acid) and CSH.

AUTEUR(S)
Nadia KAÏD, Jacques POTUS, Jacques NICOLAS

Reçu le 20 septembre 1999.    Accepté le 15 décembre 1999.

MOTS-CLÉS
thiols, acide ascorbique, glutathion, cystéine, GSH-DHA oxydoréductase.

KEYWORDS
thiols, ascorbic acid, glutathione, cysteine, GSH-DHA oxidoreductase.

CITATIONS
sda.revuesonline.com/revues/3/citation/3101.html

LANGUE DE L'ARTICLE
Anglais

 PRIX
• Abonné (hors accès direct) : 34.95 €
• Non abonné : 34.95 €
|
|
--> Tous les articles sont dans un format PDF protégé par tatouage 
   
ACCÉDER A L'ARTICLE COMPLET  (214 Ko)



Mot de passe oublié ?

ABONNEZ-VOUS !

CONTACTS
Comité de
rédaction
Conditions
générales de vente

 English version >> 
Lavoisier